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    5XFAD

    更新時間:2017-02-13   點擊次數:8183次

    5XFAD小鼠基因檢測報告-2016.9.7

    動物品系: 5XFAD 小鼠                  操作日期:2016.9.5-2016.9.7

    1.主要試劑         

    試劑名稱

    生產廠家

    備注

    上游引物oIMR 3610

    Invitrogen

    下游引物oIMR 3611

    Invitrogen

    上游引物oIMR1644

    Invitrogen

    下游引物oIMR 1645

    Invitrogen

    陽性內標oIMR7338

    Invitrogen

    陽性內標oIMR7339

    Invitrogen

    TE緩沖液

    Invitrogen

    瓊脂糖

    Invitrogen

    Sybr Safe 染液

    Invitrogen

    TAE緩沖液

    自制

    EmeraldAmp PCR Master Mix

    TAKARA

    RNase-free

    GIBCO

    注:實驗中用到的試劑在備注項打“√”,沒有用到的試劑打“—”,與列表不一致的試劑在備注中說明。

    2.主要儀器: 

    儀器名稱

    生產廠家

    儀器型號

    儀器編號

    備注

    MINI離心機

    FORCE

    SBC140-2

    SB0363

    漩渦混合儀

    Scientific Industries

    G560E

    SB0484

    電子天平

    AL104-IC

    梅特勒托利多

    SB0006

    PCR

    BIO-RAD

    Thermal Cycler

    SB0407

    移液器

    Thermo/ Eppendorf/Brand

    P10/P100/

    P200/P1000

    SB0108/SB0230

    SB0608/SB0089

    注:實驗中用到的儀器在備注項打“√”,沒有用到打“—”,與列表不一致的在備注中說明。

     

    3.PCR操作步驟     

     

    試劑

    體積(μl

    模板

    1

    oIMR3610

    0.4

    oIMR3611

    0.4

    oIMR1644

    0.4

    oIMR1645

    0.4

    oIMR7338

    0.4

    oIMR7339

    0.4

    Master mix (2×)

    10

    RNase-free

    6.6

    終體積

    20

     

     

    4. PCR反應條件

    94  3 min

    94  30 sec, 54 60 sec,72 60 sec  35×;

    72  5 min

     

    5. 1%瓊脂糖凝膠電泳體系

        稱取 1.6 (1.6g)瓊脂糖加入  100  (100ml)TAE緩沖液中混勻,微波爐加熱兩次沸騰后加7μl染液,混勻,倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl樣本,每行*孔加入5μl Marker。進行凝膠電泳。

    6. 拍圖

       完成的凝膠電泳經過凝膠成像系統拍圖得出結果

     

     

     

     

     

    7. 結果判定標準

    引物名稱

    序列(5’→3’)

    PCR產物大小

    上游引物oIMR 3610

    AGGACTGACCACTCGACCAG

    377bp

    下游引物oIMR 3611

    CGGGGGTCTAGTTCTGCAT

    上游引物oIMR1644

    AATAGAGAACGGCAGGAGCA

    608bp

    下游引物oIMR 1645

    GCCATGAGGGCACTAATCAT

    陽性內標oIMR7338

    CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT

    324bp

    陽性內標oIMR7339

    GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC

     

     

    8. 結果判定

    根據成像結果及判定標準,陽性動物編號如下:共計16只

    8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、

    8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596

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